實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>根據(jù)用戶實(shí)驗(yàn)需求,此次實(shí)驗(yàn)選用小鼠皮下黑色素瘤單細(xì)胞為樣品,對(duì)其樣品進(jìn)行單細(xì)胞懸液的制備。
實(shí)驗(yàn)選用儀器:溫控型單細(xì)胞懸液制備儀JX-CKSM-6WK
制備單細(xì)胞懸液的實(shí)驗(yàn)步驟:
1.在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,我們需要提前準(zhǔn)備好單細(xì)胞制備儀JX-CKSM-6WK一臺(tái),溫和型消化酶,終止液和洗滌管
2.在實(shí)驗(yàn)前,需要先將消化液和終止液冷水慢慢解凍,不可加熱,不可劇烈搖晃;解凍后的消化酶和終止液放在冰上待用
3.選取健康小鼠1只,斷頸處死,打開(kāi)腹腔,取出腫瘤,放置冰塊上
4.將其取出的樣品組織放在培養(yǎng)皿中,用1XPBS洗滌器官等樣品組織
5.將選取的組織塊用眼科剪剪成糊狀。(在一個(gè)干凈的皿中放入1ml左右消化液,將我們?nèi)∠碌男K放進(jìn)去剪成糊狀,然后用移液槍將消化液和糊狀樣本放入消化管中)再將管中消化液補(bǔ)充滿
6.開(kāi)啟實(shí)驗(yàn)儀器,將其樣品管放入單細(xì)胞制備儀的管架上,管架預(yù)熱5分鐘
7.選擇模塊1進(jìn)行實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)束后儀器自動(dòng)停止
8.流式分析或者單細(xì)胞測(cè)序用40um濾網(wǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)可用70um-100um較粗一些的濾網(wǎng)過(guò)濾,加入終止液終止消化(消化液:終止液1:2)。管子放在冰上過(guò)濾
9.過(guò)濾后的懸液放到離心機(jī)上重懸(230g離心力,離心7分鐘)
10.重懸后棄掉上清,加入少量DPBS打散混勻底部沉淀細(xì)胞,該懸液即單細(xì)胞懸液
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1.組織一定要現(xiàn)取
2.取完組織后放到冰上保證細(xì)胞活性
小鼠腫瘤組織單細(xì)胞懸液的制備效果: