單細胞高通量液滴測序Drop-seq技術是一種可快速分析數千個單細胞的方法。通過此測序方法是能夠將每個細胞包裹在納升級的微滴中,進行RNA雜交并產生MRNA轉錄,可進一步分析MRNA轉錄的起源細胞。
單細胞高通量液滴測序過程
1、準備材料
把細胞從樣品組織中分離出來,制備細胞懸浮液,制備微珠懸浮液帶分子條形碼。
2、微滴制備
把細胞懸浮液和微珠懸浮液泵入芯片,然后與油匯合形成單獨分散的微滴,用每個微珠將每個細胞包裹在同一個微滴中。
3、RNA雜交
細胞組織在微滴中裂解,釋放mRNA,細胞在微珠上與分子條碼雜交。
4、逆轉錄
為了形成mRNA逆轉錄物(STAMPS),裂解微滴,釋放mRNA雜交物,開始逆轉錄。
5、PCR擴增
在核酸外切酶的作用下,切斷每個MRNA逆轉錄物,并通過PCR擴展核酸,以擴大基因信息。
6、測序分析
采用各種生物信息學工具來對細胞生物進行測序分析。
液滴微流控是可快速分離微體積中的樣本,可實現數千上萬個細胞的平行高通量分析,通常每秒可產生1000個微滴,每個微滴體積為1nl;此外,在液滴微流控實驗過程中是不需要使用流熒光細胞儀等實驗儀器,實驗操作簡單、快速、便捷。
上述便是采用單細胞高通量液滴測序Drop-seq對樣本組織細胞的分離過程,將其細胞在微滴中升級,進而進行雜交轉錄,進而可分析出轉錄物的起源細胞樣本組織。