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單細(xì)胞懸液制備結(jié)果不符合實(shí)驗(yàn)需求,該如何解決
技術(shù)文章 2022-06-15

  單細(xì)胞懸液測序是能夠在單細(xì)胞層面進(jìn)行高分辨率分析,避免了傳統(tǒng)基因組技術(shù)平均信號產(chǎn)生的結(jié)果誤差,是能夠揭示單個(gè)細(xì)胞的狀態(tài)和功能。


  單細(xì)胞懸液制備儀


  由于不同類型的組織細(xì)胞有著不同的細(xì)胞組成,也有著不同的細(xì)胞排列方式,而這也就進(jìn)一步的導(dǎo)致了組織細(xì)胞在懸液制備時(shí),有著不同的實(shí)驗(yàn)條件。然而單細(xì)胞懸液的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也都是不定符合需求。

  

  如若細(xì)胞直徑為6-8μm的細(xì)胞占比比例較高,且核率較低,則表明紅細(xì)胞含量可能較高,因此需要對其進(jìn)行紅細(xì)胞裂解。如若紅細(xì)胞裂解仍然不干凈,則不建議繼續(xù)增加裂解系統(tǒng),可以適當(dāng)?shù)难娱L裂紋時(shí)間或是增加裂紋次數(shù)。

  

  細(xì)胞結(jié)塊率高的主要原因是組織沒有完全消化或是細(xì)胞釋放的DNA導(dǎo)致細(xì)胞的粘連;所以是有必要采取一定的措施將其進(jìn)行優(yōu)化,如調(diào)整消化條件、DNA酶治療和輕微吹細(xì)胞團(tuán)等措施進(jìn)行操作。

  

  如若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組織的活性較低,是需要通過去除死細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)來提高樣品活性。一般來說,死細(xì)胞去除在60%-75%的細(xì)胞活性范圍內(nèi)是會具有較好的效果。

  

  有時(shí),在獲得細(xì)胞懸液后,如若這些參數(shù)不符合預(yù)期效果,則需根據(jù)具體情況去進(jìn)行優(yōu)化,例如細(xì)胞活率、結(jié)團(tuán)率、濃度、直徑分布等參數(shù),但在優(yōu)化操作中,切記其優(yōu)化方法操作是正確的,避免錯(cuò)誤的優(yōu)化方法對細(xì)胞組織帶來的損耗。


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